非洲豬瘟檢測(cè)試劑采用間接ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被純化的ASF抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有ASF病毒特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與檢測(cè)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物；在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度A值。
非洲豬瘟檢測(cè)試劑的注意事項(xiàng)：
1、試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時(shí)以上。使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。
2、不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
3、底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。
4、TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
5、檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。
6、所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
7、嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。
8、血清稀釋板為一次性用品，不得重復(fù)使用；血清稀釋板的最大容量為300μl/孔。
非洲豬瘟檢測(cè)試劑的操作步驟：
1、取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照1孔，陽性對(duì)照2孔，取陰性及陽性對(duì)照各100μl分別加入反應(yīng)孔中，輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。
2、蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪），置37℃溫育30分鐘。
3、小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次，最后在干凈吸水紙上拍干。
4、每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。
5、小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌4-6次,方法同3。切記最后在干凈吸水紙上拍干。
6、每孔加顯色液100µl，輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
7、每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
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