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動物源性檢測試劑的操作方法介紹

更新時間:2021-09-01 點擊量:1308
  動物源性檢測試劑適用于粗品動物源性原料的摻假檢測,運(yùn)用配套的磁珠法試劑盒提取DNA,已提取的DNA為模板進(jìn)行實時熒光PCR擴(kuò)增,以實時定量檢測技術(shù),采用單重PCR方法將所用試劑配置成預(yù)混合形式組建成實時熒光PCR(豬源和反芻源)DNA檢測試劑盒,其中一管是檢測樣本中豬基因的含量(FAM熒光) 另一管是檢測樣本中反芻源動物的基因的含量。
  用戶只需每孔加5ul的DNA樣品即可上機(jī)測試,大大提高了使用的便捷,同時減少了交叉污染的機(jī)率,避免整個試劑盒反復(fù)凍融,從而影響檢測效果。
  動物源性檢測試劑如何去操作呢?
  1、需要按試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好動物源性DNA檢測試劑盒各種組分的工作液。
  2、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔。
  3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
  4、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。
  5、用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
  6、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,加入過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100μL。
  7、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
  8、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL,用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘。
  9、如此重復(fù)4次,若使用自動洗板機(jī),請按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板,添加浸泡20秒的程序,可以提高檢測的精度;洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應(yīng)板。
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